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      免疫組化實驗常見問題和解決方法
      更新時間:2016-04-12 點擊次數:2356

      免疫組化實驗的不順心是否讓你很苦惱,來看看恒遠為你支招解決各種免疫組化的疑難雜癥?。?/p>

      染色過強

      原因解決方法
      抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長

      降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體) 抗體孵育時間:室溫1小時或4℃過ye

      孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃
      DAB 顯色時間過長或 DAB 濃度過高顯色時間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準

      非特異性背景染色

      原因解決方法
      操作過程中沖洗不充分每步沖洗3×5
      組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長
      組織中含內源性生物素正常非免疫動物血清再封閉
      血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時間

      染色弱

      原因解決方法
      抗體濃度過低,孵育時間過短提高抗體濃度,孵育時間不能少于60分鐘
      試劑超過有效使用期及時更換試劑
      操作中,滴加試劑時緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥)
      室溫太低,低于15℃若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過ye)
      蛋白封閉過度封閉時間不要超過10分鐘

      染色陰性

      原因解決方法
      操作步驟錯誤重新試驗,設立陽性對照
      組織中無抗原設立陽性對照片,以驗證實驗結果
      一抗與二抗種屬連接錯誤仔細確定一抗與二抗種屬無誤

      對實驗有任何問題和建議,對公司產品有任何疑問的,都咨詢或在線咨詢,上海恒遠竭誠為您服務!

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